文章摘要:[目的]利用体外培养的绵羊附睾上皮细胞（EECs）探究谷胱甘肽过氧化物酶5（GPX5）的抗氧化功能。[方法]体外分离培养并鉴定绵羊EECs后备用。筛选合成3条GPX5的siRNA序列（siRNA-N.1、siRNA-N.2、siRNA-N.3）,同时随机设计一段不与GPX5重合的扰码（scramble）序列（siRNA-NC）,采用瞬时转染法转染EECs,以正常的EECs为对照（CK）,于转染34 h后取样,从mRNA和蛋白水平检测GPX5的干扰效果。采用CCK-8法检测GPX5干扰组、siRNA-NC组和CK组EECs的增殖能力,采用DCFH-DA探针法检测其活性氧（ROS）水平,采用TBA法检测其丙二醛（MDA）水平,采用免疫荧光法检测其8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）水平。[结果]分离培养的细胞可与角蛋白18（CK18）特异性抗体反应,表明细胞为EECs,可用于后续试验。siRNA-N.3（即siRNA-GPX5）对EECs GPX5 mRNA和蛋白表达的干扰效果最优,可用于后续试验。随着过氧化氢（H₂O₂）处理浓度的增加,与CK组相比,siRNA-GPX5组EECs的增殖能力持续下降。与CK组相比,siRNA-GPX5组EECs中的ROS和MDA水平分别极显著（P<0.01）和显著（P<0.05）升高,8-OHdG水平明显上升。[结论]GPX5可以有效保护绵羊EECs,使其免受脂质过氧化损伤及DNA氧化损伤。

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论文DOI:10.13207/j.cnki.jnwafu.2022.08.002

论文分类号:S826